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本制品Bst II DNA Polymerase(Large Fragment），不含甘油，可用于制备各种冻干试剂。使用过程中避免反复冻融。Bst II DNA Polymerase (Large Fragment)截短去除了Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的5'→3'核酸外切酶结构域，经定向进化改造，在大肠杆菌中重组表达获得。本品具有很强的5'→3' DNA聚合酶活性和链置换活性，最适反应温度为65℃，适用于多种等温扩增反应，如环介导等温扩增(LAMP)、滚环扩增(RCA)、解旋酶依赖性扩增(HDA)等。相比野生型，Bst II DNA Polymerase(Large Fragment)具有更快的扩增速率、更强的dUTP耐受性和耐盐性、以及更好的稳定性。

• 蛋白纯度检测：使用SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。
  
• 核酸内切酶活性检测：将40U Bst II DNA Polymerase与200ng超螺旋质粒DNA在37℃下，共同温育4h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。
  
• 非特异性核酸酶活性检测：将40U Bst II DNA Polymerase与15ng双链DNA片段在37℃温育16h，使用琼脂糖凝胶电泳检测双链DNA底物无变化。
  
• RNase活性检测：将40U Bst II DNA Polymerase与500ng总RNA在37℃温育1h，使用琼脂糖凝胶电泳检测超过90%的RNA仍保持完整。
  
• 宿主DNA残留检测：使用大肠杆菌16S rDNA特异性引物探针组，采用荧光定量PCR法检测40U Bst II DNA Polymerase，大肠杆菌宿主基因组DNA残留低于10 copies。

• 使用在线工具http://primerexplorer.jp/lampv5e/index.html设计引物。
  
• 按下表在冰上配制反应混合液，试剂和模板配制最好在不同区域进行，最后加入模板：
  

  成分	用量	终浓度
  10×Bst II Reaction Buffer	2.5μL	1×
  MgSO4 (100mM)	1.5μL	6mM (8mM total)
  dNTP Mix (10mM each)	3.5μL	1.4mM each
  dUTP (10mM) (可选)	1.5μL	0.6mM
  HL-Uracil DNA Glycosylase (1U/μl) (可选)	1μL	0.04U/μL
  FIP/BIP Primers (20μM)	2μL each	1.6μM each
  F3/B3 Primers (20μM)	0.25μL each	0.2μM each
  LoopF/LoopB Primers (20μM) (可选)	1μL each	0.8μM each
  Bst II DNA聚合酶(大片段，无甘油，8U/μL)	1μL	0.32U/μL
  DNA模板	1～5μL	＞10 copies/rxn
  ddH2O	至5μL	-

  • 1×Bst II Reaction Buffer中已包括2mM MgSO4，根据实验需求，Mg²⁺终浓度可在4～10mM之间调整；
    
  • LAMP反应非常灵敏，极易受到残留扩增产物气溶胶污染，可使用热敏感HL-Uracil DNA Glycosylase配合dUTP来消除相关污染（前提是前次扩增也使用dUTP）；
    
  • 引物加入量较少，可预先配成引物预混液；
    
  • 根据实验需求，Bst II DNA聚合酶(大片段，无甘油)终浓度可以在0.08～0.32U/μL之间调整。
• 轻微振荡或短暂涡旋混匀，瞬时离心收集至管底。
  
• 按如下程序进行反应：
  

  步骤	温度	时间
  消除残留污染（可选）	25℃	5～10min
  LAMP扩增	60～65℃	30～60min
  热失活	85℃	5min

• 使用琼脂糖凝胶电泳或荧光染料检测产物。